1江南大学,食品科学与技术国家重点实验室,无锡 214122
2江南大学生物工程学院,工业生物技术教育部重点实验室,无锡 214122
摘要:【目的】β-葡萄糖苷酶可用于酶法生产龙胆低聚糖。为了给龙胆低聚糖的生产提供大量的酶来源,构建基因工程菌表达黑曲霉(CMI CC 324626)β-葡萄糖苷酶基因(bgl )并研究重组酶生产龙胆低聚糖的工艺条件。【方法】将bgl克隆到表达载体pPIC9K ,转化毕赤酵母(Pichia pastoris)KM71 。表达产物通过HPLC和LC-MS鉴定了其可用于生产龙胆低聚糖的转苷活性,并对酶转化葡萄糖生产龙胆低聚糖的反应条件进行了优化。【结果】实现了β-葡萄糖苷酶的过量表达。当底物葡萄糖浓度为80%,反应 pH4.5,温度为60℃,加酶量为每克葡萄糖60U,添加1mmol/L 的K+ ,转化周期为48h ,龙胆低聚糖累计达到最大为 50g/L。【结论】本研究是国内外首次利用重组酶酶法生产龙胆低聚糖的报道